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- Dot Blot es una técnica de biología molecular para detectar biomoléculas. Representa una simplificación de los métodos Northern blot, Southern blot o Western blot. En un dot blot las biomoléculas para ser detectados no son separadas por cromatografía. En cambio, una gota que contiene la molécula para ser detectada se aplica directamente sobre una membrana. Esto es seguido por la detección por sondas de nucleótidos (northern blot y southern blot) o anticuerpos (para un western blot). La técnica ofrece importantes ahorros en tiempo. Sin embargo, no ofrece información sobre el tamaño de la biomolécula blanco. Además, si dos moléculas de diferentes tamaños son detectadas, se seguirá viendo como un solo punto. Por lo tanto el dot blot sólo puede confirmar la presencia o ausencia de una biomolécula o biomoléculas que pueden ser detectados por las sondas de ADN o el anticuerpo. La siguiente imagen ilustra el resultado obtenido de realizar un protocolo dot blot en el que se fijaron muestras de ADN a la membrana, y posteriormente se hibridaron con sondas marcadas radiactivamente específicas de ciertas regiones del ADN de estudio. Solamente las muestras portadoras de la región de interés se revelaron (puntos oscuros). Cuanto mayor es la cantidad del ADN de interés, mayor es la intensidad del color negro. Una muestra radiactiva puede ser hibridada para permitir al investigador detectar la variación entre muestras. El ADN es cuantificado y repartido en partes alícuotas en tubos en exceso con respecto al número de moléculas blanco en las muestras, por ejemplo 10 ug de un plásmido y 1 ug para una ampliación por PCR. Estos se desnaturalizan (hidróxido de sodio (NaOH) y 95 °C) y se añade a los pocillos donde el vacío succiona el agua (con NaOH y acetato de amonio (NH4OAc)) por debajo de la membrana (nylon o nitrocelulosa). (es)
- Dot Blot es una técnica de biología molecular para detectar biomoléculas. Representa una simplificación de los métodos Northern blot, Southern blot o Western blot. En un dot blot las biomoléculas para ser detectados no son separadas por cromatografía. En cambio, una gota que contiene la molécula para ser detectada se aplica directamente sobre una membrana. Esto es seguido por la detección por sondas de nucleótidos (northern blot y southern blot) o anticuerpos (para un western blot). La técnica ofrece importantes ahorros en tiempo. Sin embargo, no ofrece información sobre el tamaño de la biomolécula blanco. Además, si dos moléculas de diferentes tamaños son detectadas, se seguirá viendo como un solo punto. Por lo tanto el dot blot sólo puede confirmar la presencia o ausencia de una biomolécula o biomoléculas que pueden ser detectados por las sondas de ADN o el anticuerpo. La siguiente imagen ilustra el resultado obtenido de realizar un protocolo dot blot en el que se fijaron muestras de ADN a la membrana, y posteriormente se hibridaron con sondas marcadas radiactivamente específicas de ciertas regiones del ADN de estudio. Solamente las muestras portadoras de la región de interés se revelaron (puntos oscuros). Cuanto mayor es la cantidad del ADN de interés, mayor es la intensidad del color negro. Una muestra radiactiva puede ser hibridada para permitir al investigador detectar la variación entre muestras. El ADN es cuantificado y repartido en partes alícuotas en tubos en exceso con respecto al número de moléculas blanco en las muestras, por ejemplo 10 ug de un plásmido y 1 ug para una ampliación por PCR. Estos se desnaturalizan (hidróxido de sodio (NaOH) y 95 °C) y se añade a los pocillos donde el vacío succiona el agua (con NaOH y acetato de amonio (NH4OAc)) por debajo de la membrana (nylon o nitrocelulosa). (es)
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