EcoRV (pronunciada "eco R cinco", número CAS 83589-02-0 , EC 3.1.21.4) es una endonucleasa de restricción tipo II aislada de ciertas cepas de Escherichia coli. Tiene el nombre alternativo de Eco32I. En biología molecular, es una endonucleasa de uso común que crea cortes con extremos romos. La enzima reconoce la secuencia de ADN palindrómica de 6 bases: 5'-GAT | ATC-3' y hace un corte en vertical. La secuencia complementaria es 3'-CTA | TAG-5'. Los extremos son romos y pueden ser ligados a un sitio de clonación de extremo romo fácilmente, pero con menor eficacia que un extremo pegajoso.
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